蛋白層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體，一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外，直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關(guān)，但由于軟凝膠柱過(guò)高擠壓變形阻塞，一般不超過(guò)1米。

　　蛋白層析柱的工作原理

　　1.預(yù)處理：在吸附樹(shù)脂的生產(chǎn)過(guò)程中，一般采用的是工業(yè)級(jí)原料，產(chǎn)品沒(méi)有經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化處理，樹(shù)脂內(nèi)部殘留少量單體，所以在使用之前，需用水溶性溶劑對(duì)其浸泡處理，然后用去離子水通過(guò)樹(shù)脂層，置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。

　　2.逆流洗柱：用水洗出去水離子及破碎填料，樹(shù)脂裝入后，用蒸餾水反洗樹(shù)脂層，直至出水清晰、無(wú)氣味、無(wú)細(xì)碎樹(shù)脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹(shù)脂層，至出水呈中性為止。

　　3.水洗：水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。

　　4.吸附：吸附操作自上而下(或自下而上)通液，可采用不同流速，以選取*條件。流出液每隔一段時(shí)間取樣檢測(cè)，達(dá)泄漏點(diǎn)停止吸附，或多柱串聯(lián)達(dá)飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物，該過(guò)程應(yīng)控制料液的速度及吸附量，大孔樹(shù)脂應(yīng)*浸泡在料液里，以提高吸附效果和運(yùn)行穩(wěn)定性。

　　5.解吸、再生：解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑，單柱吸附時(shí)，解吸與吸附操作對(duì)流為佳。解吸劑沸點(diǎn)要低以便回收處理。